Cuarentena Posentrada In Vitro. Etapa 4: Periodo de cuarentena

Etapa Nombre Inicio Término
4 PERÍODO DE CUARENTENA ESTABLECIMIENTO CUARENTENA EMISIÓN SOLICITUD TÉRMINO CUARENTENA

El Importador, será el responsable de proporcionar buenas condiciones de crecimiento para el material establecido en CPE, manteniendo la  identificación y trazabilidad de este, a objeto que el Servicio pueda realizar la verificación fitosanitaria requerida.

Para la verificación fitosanitaria que realiza el Servicio, la Contraparte Técnica deberá efectuar las siguientes actividades, de acuerdo a la EC en la que se conduzca la CPE:

4.1. Inspecciones:

A. Estación Cuarentenaria 3:

  • El envío ingresado a CPE debe mantenerse identificado y separado de cualquier material vegetal existente en el Laboratorio, incluso de otra CPE ingresada bajo el amparo de otra Resolución Autoriza Cuarentena Posentrada.
  • El envío se debe mantener identificado a nivel de especie y variedad/clon.
  • Cada Cuarentena In Vitro se mantiene en una o más bandejas contiguas (dependiendo al tamaño de la CPE), las que deben permanecer identificadas con el N° de la Resolución Autoriza Cuarentena Posentrada.
  • Cada envase tanto del material original como el derivado de éste se debe mantener rotulado con la siguiente información: N° y fecha Resolución Autoriza CPE, nombre o código de la especie/ variedad, fecha y N° de repique. En caso de que las variedades sean identificadas con códigos, se debe entregar al/a la Encargado/a Sectorial de CPE una lista con la relación de código o clave vs. nombre de la especie/ variedad/ clon.
  • Todas las labores de manejo del material deben ser previamente autorizadas por el Servicio, solicitando la autorización la Contraparte Técnica por escrito, con 24 horas de antelación, a través de la Solicitud Para Realizar Prácticas de Manejo en Cuarentena Posentrada Predial/In Vitro.
  • TRASLADO A ESTRUCTURA DE CONFINAMIENTO: Una vez que se haya enviado la muestra al laboratorio para análisis de las Declaraciones Adicionales, a solicitud de la Contraparte Técnica se puede autorizar el traslado del material de una EC3 a una EC 2. Esta labor debe realizarse en presencia de el/la Encargado/a Sectorial de CPE, bajo los resguardos necesarios. La estructura debe ser autorizada previamente por el Servicio, a través de la Resolución correspondiente, y debe corresponder a la descrita para Cuarentena Predial – 2.2. Evaluación Lugar de Cuarentena Posentrada.

B. Estación Cuarentenaria 2: Se debe dar cumplimiento a lo descrito para Cuarentena Predial.

Agromillora Sur S.A:, Región del Maule Agromillora Sur S.A:, Región del Maule

4.2. Muestreo Fitosanitario: Durante el período de cuarentena se captan muestras tendientes a verificar la presencia o ausencia de la totalidad de las plagas señaladas como Declaración Adicional en la Resolución N° 633 de 2003 y sus actualizaciones.

El muestreo se realiza por especie y variedad/clon, y se encuentra orientado tanto a la manifestación de síntomas/ signos, muestreo sintomático, como a la ausencia de éstos, muestreo asintomático a objeto de verificar las declaraciones adicionales de la especie. Para el caso del muestreo asintomático se realizan procedimientos diferentes para los materiales conducidos en EC 3 y EC 2.En la eventualidad que por características del material o condiciones de muestreo, transporte y/ o conservación, las muestras no fueran apropiadas para el diagnóstico, se procederá a captar una nueva muestra en el siguiente repique o inspección. Todos los materiales requeridos para la captación y traslado de las muestras son aportados por el Importador, y deben estar disponibles en cantidad y tipo para la realización de esta actividad.Muestreo Asintomático en Cuarentena Posentrada

A. Estación Cuarentenaria 3:

a. Aspectos Generales Si el material se conduce en EC 3, la cantidad mínima de plántulas a muestrear es de 15 por variedad/clon; a objeto que el Laboratorio SAG disponga de una cantidad suficiente de material para realizar los análisis para verificar la declaraciones adicionales que se solicitan para especie. En atención a la cantidad de plántulas ingresadas por variedad/ clon, se definen las siguientes alternativas para la realización de la captación de muestras:

b. Muestreo para envíos que ingresan en cantidades superiores a 100 plántulas por variedad/ clon.

Para esta situación el material vegetal no requiere repicarse para la captación de muestra, definiéndose la oportunidad de muestreo en base a condiciones específicas del envío.

b.1. Nivel de muestreo: la captación de muestra se basa en la Tabla de Muestreo establecida en la Resolución N° 633 de 2003, de acuerdo al número total de plántulas ingresadas por variedad/ clon.b.2. Tamaño de la plántula: el tamaño mínimo que deben tener las plántulas para ser enviada a los Laboratorios de Virología y/o Bacteriología del Servicio, es de 1.5 a 3 cm., dependiendo de la especie.b.3. Momento del muestreo: el muestreo puede efectuarse al momento de la recepción del material en la EC 3 o durante el primer repique, cuando las condiciones del material así lo requieran.

b.3.1. Muestreo al momento de la recepción en la EC 3: Si el material ingresa en envases individuales, se procede a captar muestras al momento de la recepción en la EC 3, en el envase original. Esto siempre que las plántulas tengan un tamaño adecuado para realizar el análisis de virología y bacteriología (1.5 a 3 cm. dependiendo de la especie).El resto del envío debe continuar bajo control oficial, en la EC 3, a la espera de los resultados de los análisis, permitiéndose el repique del material, el que debe ser previamente autorizado por el Servicio. Del mismo modo, se puede autorizar el traslado a una EC 2 previamente autorizada por el Servicio.b.3.2. Muestreo posterior al momento de la recepción: El muestreo será aplazado con el fin de lograr las condiciones adecuadas de tamaño y representatividad de la muestra a captar, siempre que se cumpla con las siguientes circunstancias:

  • Material vegetal débil o de tamaño pequeño: en este caso el material se debe mantener en crecimiento, previo a la captación de muestra, hasta lograr el tamaño adecuado (1.5 ó 3.0 cm., dependiendo de la especie). En este caso las plántulas pueden permanecer desarrollándose en el mismo envase en que llegaron o transferirse a otro envase con agar.
  • Envío ingresa en envases colectivos (que contengan más de una plántula): con el fin de que la muestra sea representativa, se debe extraer la muestra (plántula) de la mayoría de los envases que conforman el envío. En este caso, la captación de muestra debe realizarse al momento del primer repique o transferencia de las plántulas a otro envase, conformándose en este momento los frascos muestras.
  • Medio nutritivo viene en malas condiciones (envases volcados, agar licuado u otro): el material vegetal puede repicarse o transferirse a otro envase. Al momento del primer repique o transferencia, se deben formar los frascos muestras.

b.4. Frascos Muestras: los frascos muestras se deben formar en el primer repique o transferencia del material, en presencia del Encargado/a Sectorial de CPE y deben quedar identificados como Muestra SAG, en la cámara de crecimiento, hasta que la plántula obtenga el tamaño adecuado (1.5 a 3 cms, de acuerdo a la especie vegetal).

Los frascos muestras se forman captando explantes o plántulas de todos los envases o de la mayoría de ellos, en caso de que éstos superen el número de muestras a captar, con el fin de que la muestra sea representativa.

c. Muestreo para Envíos que Ingresan en Cantidades Iguales o Inferiores a 100 Plántulas por Variedad/ clon

En este caso el material requiere repicarse para la captación de muestra; presentándose dos situaciones dependiendo de la cantidad de plántulas que conforman el envío al ingreso a Cuarentena:

c.1. Rango de 1 a 21 plántulas del envío por variedad/clon (material escaso):

c.1.1. Nivel de muestreo: 15 plántulas.

c.1.2. Tamaño de la plántula: se encuentra relacionado con la especie vegetal:

• Frutales Mayores: Plántulas de 1.5 cm. como mínimo.• Frutales Menores, vides, ornamentales y hortalizas: Plántulas de 3.0 cm. como mínimo.

c.1.3. Momento del muestreo: por tratarse de material escaso el muestreo (formación de frascos muestras) debe realizarse lo más pronto posible, una vez logrado el tipo y cantidad de material requerido para extraer la muestra.

c.2. Rango desde 22 a 100 plántulas del envío por variedad/clon:

c.2.1. Nivel de muestreo: el número de plántulas o explantes a captar por variedad será de acuerdo a lo que indica la Tabla de Muestreo establecida en la Res. N° 633 de 2003, tomando como base la cantidad de plántulas que ingresan a cuarentena.

c.2.2. Tamaño de la plántula: se encuentra relacionado con la especie vegetal:

  • Frutales Mayores: plántulas de 1.5 cm. como mínimo.
  • Frutales Menores: vides, ornamentales y hortalizas: Plántulas de 3.0 cm. como  mínimo.c.2.3. Momento del muestreo: En este caso se procede a extraer la muestra al momento de la recepción del material en la cuarentena, si así lo solicita el Importador o en el primer repique.

c.2.3.1. Muestreo al momento de la recepción: Si el material viene en frascos u tubos individuales, con plántulas de tamaño de 1.5 ó 3.0 cm., según lo requiere la especie, y si así lo prefiere el Importador, se procede a captar muestras en el envase original, según Tabla de Muestreo establecida, siendo la referencia del muestreo la cantidad de plántulas ingresadas.

c.2.3.2. Muestreo al momento del primer repique: En este caso, se procede a captar un explante de tantas plántulas como indique la Tabla de Muestreo; colocándose éstos en envases colectivos o individuales. Esta muestra es mantenida en EC3 hasta que tenga el tamaño mínimo requerido para ser enviada a diagnóstico a los laboratorios SAG.

c.2.4. y a.2.2.4. Frascos Muestras: los frascos muestras se deben formar en el primer repique o transferencia del material, en presencia del Encargado/a Sectorial de CPE y deben quedar identificados como Muestra SAG, en la cámara de crecimiento, hasta que la plántula obtenga el tamaño adecuado, dependiendo de la especie, de 1.5 a 3 cm.

Los frascos muestras se forman captando explantes o plántulas de todos los envases o de la mayoría de ellos, en caso de que éstos superen el número de muestras a captar, con el fin de que la muestra sea representativa.

d. Resumen Muestreo en EC 3

Número de plantas del envío por variedad
 		 N° de plantas a captar por variedad
 		 Requiere Repique para muestra
 		 Tamaño plántula muestra para laboratorio
Frutales Mayores (cm) Frutales menores, vid, ornamentales, hortalizas (cm)
1 a 21 15 Sí (los necesarios 1.5 3.0
22 a 100 Lo que indica la Tabla de Muestreo Si lo desea el importador 1.5 3.0
Sobre 100 Lo que indica la Tabla de Muestreo No 1.5 1.5

B. En Estación Cuarentenaria 2:

a. Aspectos Generales. Si la Cuarentena In Vitro se conduce en una EC 2, ésta debe ser de uso exclusivo para el envío, manteniéndose el material separado e identificado por variedad/ clon.El material vegetal debe estar implantado en contenedores; no permitiéndose en esta instancia la multiplicación del material. Al mismo tiempo, las plantas deberán estar identificadas y numeradas en forma individual y permanente, dispuestas en bloques de plantas agrupadas por variedad/ clon, no pudiendo ser reubicadas durante todo el período de cuarentena.

b. Muestreo para envíos que ingresan en cantidades superiores a 100 plántulas por variedad/clon 

b.1.1. Nivel de Muestreo: la captación de muestras se basa en la Tabla de Muestreo establecida en la Res. N° 633 de 2003, de acuerdo al total de plántulas ingresadas por variedad/ clon. La muestra corresponderá a plántula.

b.1.2. Tamaño de la plántula: el tamaño mínimo que deben tener las plántulas para ser enviada a los Laboratorios de Virología y/o Bacteriología del Servicio, se encuentra asociado al momento del muestreo.

b.1. Momento del muestreo: su oportunidad depende del tipo de envases (individual o colectivo) y del tamaño de las plántulas.

b.1.1. Al momento de la recepción: para el caso que el material venga en frascos o tubos individuales y con un tamaño mínimo de 1.5 a 3 cm.- dependiendo de la especie. La muestra es captada en los envases originales.

b.1.2. Muestreo posterior a la recepción: de no venir el material en frascos individuales o que el tamaño de la plántula sea inferior a 1.5 a 3 cm., de acuerdo a la especie, se debe implantar las plántulas en sustrato y esperar a que alcance alrededor de 4 cm., de forma que se mantengan en condiciones adecuadas durante el traslado a los laboratorios del Servicio, para la realización de los diagnósticos requeridos.

c. Muestreo para envíos que ingresan en cantidades iguales o inferiores a 100 plántulas por variedad/clon. El material debe implantarse en el sustrato, dentro de la nave de cuarentena autorizada, para alcance las condiciones para su muestreo. 

c.1. Nivel de Muestreo: la captación de muestras se basa en la Tabla de Muestreo establecida en la Res. N° 633 de 2003, de acuerdo al total de plántulas ingresadas por variedad/ clon.

c.2. Tamaño de las plántulas y Momento de muestreo: de acuerdo a lo descrito en B.b.1.2.

d. Situaciones Especiales:

d.1. Rubus:

De acuerdo a lo establecido en la Resolución N° 5.724 de 2007, los envíos de cultivo in vitro de las especies del género Rubus, hospederas de Raspberry leaf curl virus, deben cumplir con Cuarentena In Vitro en Estación Cuarentenaria 2.

Agromillora Sur S.A:, Región del MauleAgromillora Sur S.A: Región del Maule

La detección de este virus se realiza exclusivamente mediante la técnica biológica de indexaje, para lo cual se requiere disponer de plantas con un desarrollo vegetativo de a lo menos 30 cm., a objeto de orientar la toma de muestra a plantas con sintomatología asociada a este virus.

Se describen dos períodos de muestreo dependiendo de la condición de las plantas de Rubus a ser muestreadas, las plantas indicadoras sobre las cuales se realizará el indexaje, y la oportunidad en que se dispondrá de los resultados de la prueba biológica, lo que determinará la extensión del período de cuarentena. 

MUESTREO FECHA RESULTADOS INDEXAJE OTRAS CONSIDERACIONES
Agosto - Diciembre Dentro de la temporada (*) Duración de la prueba bilógica, aprox. 3 meses
Enero - Marzo Próxima temporada (**) Podría requerirse remuestreo en atención a sobrevivencia de plantas muestreadas, durante el período de invierno

(*) Hasta marzo- abril de la misma temporada de muestreo. (**) Desde septiembre en adelante, en la próxima temporada de crecimiento

Las plantas que conformen la muestra son debidamente identificadas, de forma de mantener la rastreabilidad de las mismas; disponiéndolas en envases resistentes, herméticos- proporcionados por el Importador-, y debidamente sellados (sello SAG). Esta manipulación se realiza bajo condiciones de seguridad apropiadas y en presencia de el/la Encargado/a Sectorial de CPE.

Una vez realizada la prueba biológica, y si ésta da como resultado la ausencia de plagas cuarentenarias, el material vegetal sobreviviente podrá ser entregado al Importador, a solicitud de éste, debiendo ser retirado a la brevedad de las instalaciones de la ECA del Servicio. 

 Estación Cuarentenaria Agrícola: Indexaje, RubusEstación Cuarentenaria Agrícola: Indexaje, Rubus

Al mismo tiempo, personal del Servicio procede a tomar muestra para verificar el resto de las Declaraciones Adicionales asociadas a la especie, lo más tarde posible dentro de la temporada de forma de permitir el desarrollo vegetativo del material en estudio y cuando las plantas se encuentren en crecimiento activo. En atención a esto se describen dos épocas de muestreo: 

  • Primavera: desde septiembre hasta los primeros días de noviembre
  • Otoño: marzo

En ambos casos se realiza el mismo procedimiento descrito en Muestreo Asintomático en Cuarentena Posentrada.

d.2. Actinidia: De acuerdo a lo establecido en la Resolución N° 1.960 de 2014, los envíos de cultivo in vitro de las especies del género Actinidia, hospederas de Pseudomonas syringae pv. actinidae, deben cumplir con Cuarentena In Vitro en  EC 2.

Para la determinación de esta bacteria, se realiza muestreo asintomático, dando cumplimiento al siguiente protocolo de muestreo:

CONDICIÓN EPOCA MUESTREO ASINTOMÁTICO TIPO MUESTRA POR PLANTA
Toma de muestra por especie / variedad Julio-Abril (*): desde yema hinchada hasta antes del receso invernal, con plantas de alrededor de 8 meses de establecidas Parte aérea completa de la planta (incluyendo desde el cuello de ésta)
(*) Época referencial, debido a que el muestreo se encuentra relacionado con el movimiento de savia dentro de la planta, condición que presenta variación de acuerdo a la variedad.

Las plantas son dispuestas en envases resistentes, herméticos- proporcionados por el Importador-, y debidamente sellados con sello SAG, de forma de mantener condiciones de bioseguridad apropiadas para su traslado a los Laboratorios SAG.

El resto del envío, debe permanecer en la EC 2, a la espera del diagnóstico de laboratorio, para ser resuelto.

3.1. Monitoreo a través de Trampeo:

Durante el período de cuarentena el Servicio procede a la instalación de trampas de tablero pegajoso, para verificar el aislamiento de la nave de cuarentena y la presencia de insectos vectores de las plagas descritas como declaración adicional, de acuerdo a la especie vegetal cuarentenada.

3.2. Emisión Informe Solicitud de Término Cuarentena:

Una vez realizada la verificación fitosanitaria correspondiente, y encontrándose el material sin detección de plaga cuarentenaria, el/la Encargado/a Sectorial de CPE, está en condiciones de emitir y enviar el Informe Solicitud Término Cuarentena Posentrada Predial e In Vitro, a la Dirección Regional, correspondiente.